Úspěch našeho zákazníka je naším hlavním cílem – pokud potřebujete pomoci s používáním či výběrem produktů InoCure, neváhejte kontaktovat naše specialisty. Jsme připraveni pomoci uspokojit vaše potřeby!

InoMatrix kultivační destičky jsou sterilizovány gama zářením a jsou tak připraveny k okamžitému použití. V případě, že potřebujete kultivační destičky znovu vysterilizovat, můžete použít sterilizaci ethanolem:

1. Sterilizaci kultivačních destiček provádějte v laminárním boxu, kde naplňte jamky 70% ethanolem sterilní pipetou
2. Kultivační destičky s ethanolem ponechejte inkubovat při pokojové teplotě v laminárním boxu po dobu 30 minut
3. Po inkubaci vyjměte ethanol z jamek sterilní pipetou
4. Opláchněte třikrát jamky sterilním fosfátovým pufrem (PBS)

V případě potřeby lze buňky uvolnit z InoMatrix membrán enzymatickou reakcí – trypsinizací. Inkubační doba musí být prodloužena ve srovnání s kultivací buněk na plastových kultivačních destičkách

1. Pracujte sterilně v laminárním boxu za použití sterilních roztoků a pipet pro další kultivaci buněk
2. Opláchněte membrány sterilním PBS
3. Přidejte 1x koncentrovaný roztok Trypsin-EDTA (30 μl/96, 100 μl/cm²)
4. Inkubujte 10 minut v CO₂ inkubátoru při 37 °C
5. Důkladně protřepejte kultivační destičku ze strany na stranu k podpoře uvolnění buněk mechanicky
6. Zastavte reakci pomocí FBS či kultivačním médiem s obsahem nejméně 10% FBS (1:10)
7. Suspenzi buněk převeďte sterilní pipetou do sterilní centrifugační zkumavky a centrifugujte při 300 x g po dobu 5 minut

V případě potřeby, a pro analýzu membrány pomocí SEM či (konfokální) mikroskopie je snadné vyjmout vzorek z jamky kultivační destičky či inzertu. Při analýzách mějte na paměti, že membrána není transparentní a buňky jsou adherovány na horní straně membrány. Barvení buněk lze provést v kultivační destičce. Pokud používáte membrány v inzertu, tak vzorek můžete vyříznout skalpelem a jednoduše jej vyjmout z inzertu. Pokud používáte membrány v kultivační destičce tak  membránu lze z jamky vyjmout pomocí pinzety a jemného tahu (vzorek je ukotven ke dnu jamky pomocí biokompatibilního lepidla). Instrukce jak postupovat můžete nalézt v našem Protokolu „Krok za krokem v charakterizaci morfologie vzorku“.

InoMatrix kultivační destičky jsou sterilní a připraveny k okamžitému použití.  Pro nasazení buněk můžete použít Váš standartní protokol či protokol uvedený níže:

1. Pracujte sterilně v laminárním boxu
2. Zvlhčete membrány před nasazením buněk přidáním kultivačního média do jamek a inkubujte po dobu nejméně 30 minut v CO₂ inkubátoru při 37° C
3. Připravte suspenzi buněk v požadované hustotě v médiu doporučeném pro tento typ buněk. Concentrace buněk závisí na typu buněk a účelu studie (obvyklá concentrace buněk je uvedena v tabulce níže). Doporučujeme nasazení buněk v nižším objemu kultivačního media (30 – 50 μl/96 jamková destička) pro usnadnění adheze buněk na membránu.
4. Přidejte buněčnou suspenzi do jamek a nechte buňky adherovat 1 – 2 hodiny v CO₂ inkubátoru při 37° C
5. Doplňte kultivační medium do požadovaného objemu (viz. Tabulka níže doporučené objemy)
6. Vyměňte kultivační medium každé 3 – 4 dny či dle vašeho protokolu

Poznámka: concentrace buněk by měla všeobecně být vyšší ve srovnání s kultivací buněk na 2D povrchu.

Při nasazování buněk na InoMATRIX membrány v inzertech postupujte stejně dle protokolu výše, jen po inkubaci pro buněčnou adhezi přidejte kulitvační medium jak do inzertu tak též do jamky samotné, opět dle doporučených objemů (viz. Tabulka níže „ Velikost povrchu membrány v inzertech“). Velikost povrchu membrány v inzertu ve 24 jamkové destičce odpovídá velikosti povrchu jamky ve 48 jamkové destičce!

Doporučené množství media v inzertu ve 24 jamkové kultivační destičce InoMATRIX:

1. Pracujte sterilně v laminárním boxu
2. Zvlhčete membrány před nasazením buněk přidáním kultivačního média do jamek a inkubujte po dobu nejméně 30 minut v CO₂ inkubátoru při 37° C
3. Připravte suspenzi buněk v požadované hustotě v médiu doporučeném pro tento typ buněk. Concentrace buněk závisí na typu buněk a účelu studie (obvyklá concentrace buněk je uvedena v tabulce níže). Doporučujeme nasazení buněk v nižším objemu kultivačního media (200 μl/24 jamková destička) pro usnadnění adheze buněk na membránu.
4. Přidejte buněčnou suspenzi do jamek a nechte buňky adherovat 1 – 2 hodiny v CO₂ inkubátoru při 37° C
5. Doplňte kultivační medium do požadovaného objemu (viz. Tabulka níže „ Velikost povrchu membrány v inzertech“) (200 μl/24 jamková destička- celkový objem 400 μl), a 600 μl do jamky (spodní část inzertu bude též ponořena v mediu)
6. Vyměňte kultivační medium každé 3 – 4 dny či dle vašeho protokolu

Sazba buněk

Velikost povrchu membrány v inzertech a doporučené objemy kultivačního media: